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造血細胞超低溫保存箱

點擊次數:1696    更新時間:2016-03-09

  造血細胞的保存始于20世紀20年代末80年代初,短期保存是在4度下進行。在這種溫度下,離體細胞仍然保持著新陳代謝,通常只能保存4872 h。而超低溫(零下80~零下196)時,細胞內新陳代謝減慢乃至停止,則可以較長時間保存。細胞的超低溫保存在降溫和復溫過程中,其內外環(huán)境會發(fā)生一系列改變,會造成冷凍損傷,而加人細胞保護劑可減輕這種損傷,細胞復溫后可以維持初始形狀和生理功能。細胞保護劑一般分為高分子的非穿透性保 護劑 (HES、白蛋白等)和低分子的穿透性保護劑 (如 DMSO、甘油等)。造血細胞的保存初期多用10%DMSO為保護劑的程控降溫液氮液態(tài)保存,保存的骨髓細胞15年后造血細胞活力良好。程控降溫是基于造血細胞為有核細胞,在細胞溫度進人液氮內溫度前,需以12℃/rain降溫速率降溫至-60度或-80度。這種降溫方法需特殊程控降溫儀,不僅操作費時,且成本大,特別是對小樣本的保存是很不經濟的,因此限制了它的使用。我們在20世紀80年代,采用10%DMSO為保護劑,-80度低溫冰箱降溫保存骨髓 。

  研究表明,從保護劑的角度看,5%DMSO-6 %HES優(yōu)于10%DMSO。這一效果在用低溫保存箱?降溫與保存中更能得到充分體現。這可能與DM-SO對細胞有毒性作用有關。有學者報道,即使在4度下,骨髓細胞接觸5 rain10%DMSO后,CFU-GM將損失25%,30min后損失可超過75%。我們的結果顯示,這種損傷現象沒有那么嚴重,但5%DMSG-6%HES明顯減輕了這種損傷。

  低溫保存箱降溫液氮保存和低溫保存箱降溫并保存,與自控程序降溫液氮保存比,在1年內造血細胞保存效果均良好。本研究20例患者的外周血干細胞在1年內均已進行了移植,全部重建造血功能 。另有文獻報道,如果造血細胞需要長期保存,選用低溫保存箱降溫時,則以液氮保存為好,也說明-80度的低溫保存箱降溫能達到慢速降溫的效果。細胞在這種溫度下不宜長期存放,是否說明細胞在此溫度下仍保持一定程度的新陳代謝,值得進一步研究。 細胞的低溫保存是在液氮液態(tài)下保存還是在液氮氣態(tài)下保存仍有爭論,過去多是推薦液氮液態(tài)保存,現主張在液氮氣態(tài)下保存。細胞復溫后,細胞內保護劑也應立即稀釋或去除,如果細胞是給患者治療用,細胞復溫后應立即應用,在 30rain內輸人體內。

 

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